Leczenie przerzutowego czerniaka za pomocą autologicznych komórek T CD4 + przeciwko NY-ESO-1 ad

Ponieważ genotyp pacjenta HLA obejmował allel HLA-DOB1 * 0401, klony komórek T CD4 + celujące w epitop ograniczony do DPB1 * 0401 peptydu pochodzącego z NY-ESO-1 zostały wyizolowane z hodowli i rozwinięte w celu terapii komórkowej. In vitro, te klony reagowały na peptyd NY-ESO-1 przez wytwarzanie interleukiny-2 i interferonu-.. W ciągu 2 godzin pacjent otrzymał pojedynczą infuzję 3,3 x 109 klonalnych komórek T CD4 + na metr kwadratowy powierzchni ciała, w sumie 5 miliardów komórek T. Nie podawano kondycjonowania wstępnego ani interleukiny-2 po infuzji. Rycina 1. Rycina 1. Skany PET otrzymane przed infuzją komórek T i 2 miesiące po infuzji. Preinfusion-emisyjna tomografia emisyjna (PET) ujawnia zmiany hipermetaboliczne w prawym płucu i lewym pachwinowo-biodrowym węźle, które są zgodne z przerzutami (groty strzałek); zmiany chorobowe kolokalizowane na guzkach nowotworowych w tomografii komputerowej (CT). Po infuzji komórek T CD4 + specyficznych dla NY-ESO-1, skany PET pokazują, że guzki guzów uległy regresji i nie można wykryć żadnych objawów choroby. Wchłanianie w wątrobie, śledzionie i pęcherzu stanowi normalny sygnał tła i nie powoduje kolokalizacji do jakichkolwiek zmian w obrazach CT.
Przemijająca limfopenia, gorączka niskiej jakości (maksymalna temperatura, <38,5 ° C) i ból mięśni, wszystkie zgodne z uwalnianiem cytokin, 3 rozwinęły się i ustąpiły w ciągu 3 dni po wlewie. Nie stwierdzono poważnych zdarzeń niepożądanych, zgodnie z Common Toxicity Criteria National Cancer Institute. Dwa miesiące po wlewie ponowne badanie PET i CT wykazało całkowite ustąpienie choroby płucnej i węzłowej; nie było dowodów na nieprawidłowy wychwyt fluorodeoksyglukozy i żadnych innych objawów radiologicznych lub klinicznych choroby (ryc. 1). Pacjent pozostał wolny od choroby 2 lata później.
Metody
Generowanie specyficznych dla antygenu klonów komórek T CD4 +
Specyficzne dla antygenu klony limfocytów T CD4 + wytworzono w sposób podobny do tych dla komórek T CD8 + opisanych uprzednio. Niedługo, autologiczne komórki dendrytyczne pochodzące z monocytów pulsowano 40 .g peptydu NY-ESO-1 SLLMWITQCFLPVF10 na mililitr. i współhodowano z limfocytami T pacjenta w stosunku 10: (limfocyty T: komórki dendrytyczne). Interleukinę-2 (12,5 jm na mililitr) i interleukinę-7 (10 ng na mililitr) dodawano co 3 dni w celu utrzymania wzrostu aktywowanych komórek T specyficznych względem antygenu. Tydzień później komórki T ponownie stymulowano komórkami jednojądrzastymi z autoprzewodzącymi peptydami. W tydzień po drugiej stymulacji komórki T o specyficznej reaktywności względem peptydu NY-ESO-1 zebrano i sklonowano w warunkach ograniczającego rozcieńczenia w obecności napromienionych komórek odżywczych (komórki jednojądrzaste plus komórki B transformowane wirusem Epstein-Barr), monoklonalne przeciwciało anty-CD3 i interleukina-2. Klony, które wykazywały specyficzną odpowiedź proliferacyjną na peptyd NY-ESO-1 w teście inkorporacji tymidyny, ekspandowano in vitro. W sumie od pacjenta wytworzono w sumie cztery klony T CD4 + specyficzne dla NY-ESO-1. Klon wybrany do infuzji może zostać rozszerzony o czynnik od 3000 do 5000 w okresie 18 dni przy użyciu ustalonych metod. 11 Reaktywność względem NY-ESO-1 została potwierdzona po ekspansji przez przeprowadzenie testów w celu wykrycia antygenów specyficznych. proliferacja i uwalnianie interferonu-. (szczegółowe informacje można znaleźć w Dodatku uzupełniającym, dostępnym wraz z pełnym tekstem tego artykułu na stronie www.nejm.org).
Wykrywanie przeciwciał przeciwko antygenom związanym z nowotworami
W celu wykrycia przeciwciał IgG przeciwko rekombinowanym białkom pełnej długości NY-ESO-1, MAGE-3 i MART-1 (1 .g na mililitr) zastosowano test immunoenzymatyczny, jak opisano wcześniej.12 Wzajemne miana ekstrapolowano z szeregu rozcieńczenia i miana powyżej 100 uważano za reaktywne
[patrz też: tętnica zasłonowa, talasemia objawy, półpasiec icd 10 ]